Определение количества «мертвых» клеток в дрожжах
Специализированная методика «Процент количества жизнеспособных клеток» предназначена для автоматизированного подсчета процента количества мертвых клеток в культурных дрожжах низового брожения Saccharomyces carlsbergensis и зеленом пиве для нужд пивоваренной промышленности.
Определение жизнеспособности клеток широко используется в биотехнологиях и медицинской практике. Диапазон применения метода включает в себя исследования в области криоконсервации; изучение ангидробиоза; сперматологии; роста культуры, предназначенной для экспрессии рекомбинантного белка; разработки новейших методов терапии заболеваний и т.д.
Живые клетки не проницаемы для красителей вследствие способности к восстановлению молекул красителя. Мертвые клетки имеют поврежденные плазматические мембраны, проницаемы, что определяет поглощение мертвыми клетками различных красителей.
Определение живых и мертвых клеток проводится методом исключения красителя (трипанового синего, эритрозина В, нигрозина), с одновременным количественным учётом реактивированных клеток и выведением доли жизнеспособных клеток.
Автоматизированный метод оценки жизнеспособности клеток позволяет:
- определить общую концентрацию клеток
- определить процентное отношение «живых» и «мертвых» объектов
- измерить средний размер клеток и степень их округлости
- сохранить изображения клеток и произвести статистические расчеты
Как работает методика
Захват «живого» изображения текущего поля зрения препарата (получение изображения) должен осуществляться при постоянных (фиксированных) настройках микроскопа и камеры.
Выделение объектов (клеток) на изображении осуществляется автоматически. В процессе выделения происходит автоматическая достройка нечетких контуров клеток, возникающих при образовании агломератов клеток.
Как только изображение появляется на экране, программа начинает его обрабатывать - автоматически выделяет дрожжевые клетки и подсчитывает количество живых (зеленый контур) и мертвых клеток (синий контур). Классификация осуществляется по цвету клеток.Объекты, соответствующие продуктам метаболизма, автоматически исключаются из анализа.
 |
||||
| Исходное изображение клеток |
Цветокодирование с автоматическим разбиением на классы "живых" и "мертвых" |
Статистический отчет |
||
Важной особенностью подсчета является дифференцированный подход к учету почкующихся клеток. Если отношение размера дочерней и материнской клеток > ½ - считаются обе клетки; если < ½ считается только одна: материнская клетка.
В процессе набора данных информация о количестве обработанных изображений, общем числе проанализированных клеток и проценте мертвых клеток отображается в окне «Информация». Набор данных продолжается, пока не будет набрано 1000 объектов.
После окончания набора данных результаты текущего анализа автоматически заносятся в поля базы данных: Количество клеток, Процент мертвых и Допуск, поле Дата автоматически заполняется текущей датой.
Автоматизированная методика производит измерения доли нежизнеспособных клеток за очень короткой период времени, обрабатывая при этом до 1000 клеток с точностью до 0.5%.
Данный вид анализа выполнен на АПК "ВидеоТесТ-Морфология", с установленной дополнительной методикой "Живые и Мертвые".
С более подробным описанием методики можно ознакомиться в статье "Использование программного обеспечения «ВидеоТесТ-Морфология» в микологии, фитопатологии и промышленной микробиологии".
Составители: К.т.н Прияткин Н.С.(ООО "ВидеоТесТ"), ведущий микробиолог Павлова Ю.В.(Завод "Балтика-Вена"), Ганнибал Ф.Б. (ВИЗР), Гадкаева Т.Ю. (ВИЗР), Струнникова О.К. (ВНИИ Сельхоз Микробиологии).